La citometría de flujo es una técnica única utilizada por los científicos para analizar y cuantificar diferentes componentes de las células dentro de una muestra. Esta técnica es muy útil, porque permite a los investigadores determinar el número de células y el tamaño y la forma de las células de una muestra. Otra consideración de la citometría de flujo es determinar si las células están vivas o no. Para lograrlo, los científicos pasan las células a través de un rayo láser. Las células reflejan la luz roja absorbida por el láser. La luz reflejada se mide y registra. Con esta información, los investigadores pueden extraer una gran cantidad de conocimiento sobre las poblaciones celulares bajo estudio y su naturaleza. El citometría de imagen de flujo es un método popular utilizado en aplicaciones biológicas y médicas. Ayuda a los científicos a estudiar cómo funcionan las células y qué necesitan para sobrevivir. Este procedimiento es particularmente significativo en numerosos campos, incluidos la inmunología (el estudio del sistema inmunitario), la hematología (el estudio de la sangre) y la investigación reciente sobre neoplasias malignas. Aquí hay algunas cosas que los científicos deben considerar al realizar experimentos de citometría de flujo:
Preparar adecuadamente la muestra es el paso uno. Esto significa seleccionar el líquido correcto, llamado tampón, y los tintes de color adecuado para teñir las células. El paso dos es la adquisición de datos. Esta es la parte donde la muestra pasa por el citometría de flujo en células , que es donde se toman las mediciones reales. Por último, pero no menos importante, el paso cuatro es el análisis de datos. Durante esta etapa, los investigadores encuentran información útil a partir de los datos que recolectaron, lo cual les facilita su investigación. Sin embargo, hay veces que los experimentos de citometría de flujo pueden tener problemas, y es crítico que los científicos aprendan a solucionar estas situaciones. Problemas comunes que pueden ocurrir durante la citometría de flujo son coágulos celulares, instrumentos dañados y señales mezcladas. Los coágulos celulares ocurren cuando las células se agrupan, lo cual puede interferir con la medición precisa. Para reducir el agrupamiento, los científicos pueden separar las células antes de la prueba utilizando un dispositivo conocido como filtro celular.
En caso de que la máquina tenga algún problema, por ejemplo, si no funciona correctamente, se recomienda contactar a un especialista que pueda ayudar en su reparación. Otro problema que podría surgir es la interferencia de señal. Esto significa que señales externas pueden alterar los resultados. Para mitigarlo, se debe configurar el citometría de flujo multicolor cuidadosamente con un mínimo de ruido de fondo durante un experimento dado, especialmente con datos auditivos.
Ejemplos de dos tintes importantes utilizados en citometría de flujo de célula única (HC) son Hoechst 33342 y Yoduro de Propidio (PI). El Hoechst 33342 es un tinte brillante que los científicos usan para marcar células vivas. También puede ayudar a determinar si las células están sanas y vivas. Por otro lado, el PI es un marcador para células ineficaces, ya que marca el ADN dañado. Cuando el PI se une al ADN, hace que las células muertas emitan un brillo rojo, permitiendo a los científicos identificarlas fácilmente.
Hoechst 33342 también es útil para los científicos, ya que puede ser utilizado cuando necesitan verificar si las células están vivas o no durante las pruebas de citometría de flujo. De esta manera, los investigadores tiñen las células con citometría de flujo microfluido y se combina con otros tintes brillantes para medir la viabilidad celular, es decir, si las células están vivas o muertas. Esta técnica también puede informar a los científicos sobre cómo estaban creciendo las células y si estaban experimentando un proceso llamado apoptosis, cuando una célula muere de manera segura y natural.
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