La cytométrie de flux est une technique unique utilisée par les scientifiques pour analyser et quantifier différents composants des cellules au sein d'un échantillon. Cette technique est très utile, car elle permet aux chercheurs de déterminer le nombre de cellules ainsi que leur taille et leur forme à partir d'un échantillon. Une autre considération en cytométrie de flux est de déterminer si les cellules sont vivantes ou non. Pour y parvenir, les scientifiques font passer les cellules à travers un faisceau laser. Les cellules réfléchissent la lumière rouge absorbée par le laser. La lumière réfléchie est mesurée et enregistrée. Grâce à ces informations, les chercheurs peuvent extraire beaucoup de connaissances sur les populations cellulaires étudiées et leur nature. Le imagerie par cytométrie en flux est une méthode populaire utilisée dans les applications biologiques et médicales. Elle aide les scientifiques à étudier comment les cellules fonctionnent et ce dont elles ont besoin pour survivre. Cette procédure est particulièrement significative dans de nombreux domaines, y compris l'immunologie (l'étude du système immunitaire), l'hématologie (l'étude du sang) et les recherches récentes sur les tumeurs malignes. Voici quelques éléments que les scientifiques doivent prendre en compte lors des expériences de cytométrie en flux :
Préparer correctement l'échantillon est l'étape numéro un. Cela signifie sélectionner le bon liquide, appelé tampon, et les bons colorants pour marquer les cellules. L'étape 2 est l'acquisition des données. C'est la partie où l'échantillon passe par le cytométrie en débit cellulaire , qui est là où les mesures réelles sont prises. Enfin, l'étape quatre est l'analyse des données. Pendant cette phase, les chercheurs trouvent des informations utiles à partir des données qu'ils ont collectées, ce qui les aide dans leur recherche. Cependant, il arrive parfois que des expériences de cytométrie en flux rencontrent des problèmes, et il est crucial que les scientifiques apprennent à résoudre ces situations. Les problèmes courants qui peuvent survenir lors de la cytométrie en flux sont les agrégats cellulaires, les instruments défectueux et les signaux mélangés. Les agrégats cellulaires se produisent lorsque les cellules s'agglomèrent, ce qui peut interférer avec la mesure précise. Pour réduire l'agrégation, les scientifiques peuvent séparer les cellules avant le test en utilisant un dispositif appelé filtre à cellules.
En cas de problèmes avec la machine, par exemple, si elle ne fonctionne pas correctement, il est recommandé de contacter un spécialiste qui pourra assister à sa réparation. Un autre problème qui pourrait survenir est l'interférence de signal. Cela signifie que des signaux parasites peuvent altérer les résultats. Pour atténuer cela, il faut configurer le cytométrie en débit multicouleur soigneusement avec un minimum de bruit de fond pendant une expérience donnée, surtout avec des données auditives.
Exemples de deux colorants importants utilisés dans cytométrie en débit à cellule unique (HC) sont le Hoechst 33342 et le propidium iodure (PI). Le Hoechst 33342 est un colorant brillant que les scientifiques utilisent pour marquer les cellules vivantes. Il peut également aider à déterminer si les cellules sont en bonne santé et vivantes. En revanche, le PI est un marqueur pour les cellules non viables, car il marque l'ADN endommagé. Lorsque le PI se lie à l'ADN, il fait briller les cellules mortes en rouge, permettant ainsi aux scientifiques de les identifier facilement.
Le Hoechst 33342 est également utile pour les scientifiques, car il peut être utilisé lorsqu'ils doivent vérifier si des cellules sont vivantes ou non lors de tests de cytométrie en flux. De cette manière, les chercheurs colorent les cellules avec cytométrie en flux microfluidique et il est combiné avec d'autres colorants brillants pour mesurer la viabilité des cellules, c'est-à-dire savoir si les cellules sont vivantes ou mortes. Cette technique peut également informer les scientifiques sur la façon dont les cellules se développaient et si elles subissaient un processus appelé apoptose, lorsque une cellule meurt de manière sûre et naturelle.
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