A citometria de fluxo é uma técnica única usada por cientistas para analisar e quantificar diferentes componentes das células dentro de uma amostra. Essa técnica é muito útil, pois permite que os pesquisadores determinem o número de células e o tamanho e formato das células de uma amostra. Outro aspecto a considerar na citometria de fluxo é determinar se as células estão vivas ou não. Para isso, os cientistas fazem as células passarem por um feixe de laser. As células refletem a luz vermelha absorvida pelo laser. A luz refletida é medida e registrada. Com essas informações, os pesquisadores podem extrair uma grande quantidade de conhecimento sobre as populações celulares em estudo e sua natureza. citometria de fluxo de imagem é um método popular usado em aplicações biológicas e médicas. Ele ajuda cientistas a estudar como as células funcionam e o que precisam para sobreviver. Este procedimento é particularmente significativo em diversos domínios, incluindo imunologia (o estudo do sistema imunológico), hematologia (o estudo do sangue) e pesquisas recentes sobre neoplasias malignas. Aqui estão algumas coisas que os cientistas precisam considerar ao realizar experimentos de citometria de fluxo:
Preparar adequadamente a amostra é o passo um. Isso significa selecionar o líquido correto, chamado de tampão ou buffer, e as tintas colorantes adequadas para colorir as células. O passo dois é a aquisição de dados. Esta é a parte onde a amostra passa pela máquina. citometria de fluxo por célula em fluxo , que é onde as medições reais são feitas. Por último, mas não menos importante, a etapa quatro é a análise de dados. Durante esta fase, os pesquisadores encontram informações úteis nos dados que coletaram, o que facilita seu trabalho na pesquisa. No entanto, há momentos em que experimentos de citometria de fluxo podem enfrentar problemas, e é crucial que os cientistas aprendam a solucionar essas situações. Problemas comuns que podem ocorrer durante a citometria de fluxo incluem aglomerados de células, instrumentos quebrados e sinais misturados. Aglomerados de células ocorrem quando as células se unem, o que pode interferir nas medições precisas. Para reduzir o agrupamento, os cientistas podem separar as células antes do teste usando um dispositivo conhecido como filtro de células.
Caso a máquina apresente algum problema, por exemplo, se falhar ao funcionar corretamente, é recomendável entrar em contato com um especialista que ajudará na sua reparação. Outro problema que pode surgir é a interferência de sinal. Isso significa que sinais externos podem limpar os resultados. Para mitigar isso, deve-se configurar o citometria de fluxo multicor cuidadosamente com o mínimo de ruído de fundo durante um experimento dado, especialmente com dados auditivos.
Exemplos de dois corantes importantes usados em citometria de fluxo de célula única (HC) são Hoechst 33342 e iodo propídio (PI). O Hoechst 33342 é um corante brilhante que os cientistas usam para marcar células vivas. Ele também pode ajudar a determinar se as células estão saudáveis e vivas. Em contrapartida, o PI é um marcador para células não eficazes, pois marca DNA danificado. Quando o PI se liga ao DNA, faz com que as células mortas brilhem em vermelho, permitindo que os cientistas as identifiquem facilmente.
Hoechst 33342 também é útil para cientistas, pois pode ser usado quando eles precisam verificar se as células estão vivas durante os testes de citometria de fluxo. Dessa forma, os pesquisadores tingem as células com citometria de fluxo microfluídica e ele é combinado com outros corantes brilhantes para medir a viabilidade celular, ou seja, se as células estão vivas ou mortas. Essa técnica também pode informar os cientistas sobre como as células estavam crescendo e se estavam passando por um processo chamado apoptose, quando uma célula morre de maneira segura e natural.
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