La citometria a flusso è una tecnica unica utilizzata dagli scienziati per analizzare e quantificare diversi componenti delle cellule all'interno di un campione. Questa tecnica è molto utile, poiché consente ai ricercatori di determinare il numero di cellule e la dimensione e forma delle cellule provenienti da un campione. Un'altra considerazione della citometria a flusso è stabilire se le cellule siano vive o no. Per fare questo, gli scienziati fanno passare le cellule attraverso un fascio laser. Le cellule riflettono la luce rossa assorbita dal laser. La luce riflessa viene misurata e registrata. Con queste informazioni, i ricercatori possono estrarre molte conoscenze sulle popolazioni cellulari in studio e sulla loro natura. citometria a immagini a flusso è un metodo popolare utilizzato in applicazioni biologiche e mediche. Aiuta gli scienziati a studiare come funzionano le cellule e cosa hanno bisogno per sopravvivere. Questa procedura è particolarmente significativa in numerosi campi, inclusa l'immunologia (lo studio del sistema immunitario), l'ematologia (lo studio del sangue) e ricerche recenti sui neoplasmi maligni. Ecco alcune cose che gli scienziati devono considerare quando eseguono esperimenti di citometria a flusso:
Preparare correttamente il campione è il primo passo. Ciò significa selezionare il liquido appropriato, chiamato tampone, e i coloranti giusti per tingere le cellule. Il secondo passo è l'acquisizione dei dati. Questa è la parte in cui il campione passa attraverso il cytometria a flusso con cella di flusso , che è dove vengono effettuate le misurazioni reali. Infine, il quarto passaggio è l'analisi dei dati. Durante questa fase, i ricercatori estraggono informazioni utili dai dati raccolti, il che li aiuta nella loro ricerca. Tuttavia, ci sono momenti in cui gli esperimenti di citometria a flusso possono incorrere in problemi, e è fondamentale che i ricercatori imparino come risolvere queste situazioni. Problemi comuni che possono verificarsi durante la citometria a flusso sono agglomerati cellulari, strumenti guasti e segnali confusi. Gli agglomerati cellulari si formano quando le cellule si uniscono, il che può interferire con le misurazioni accurate. Per ridurre l'agglomerazione, i ricercatori possono separare le cellule prima del test utilizzando un dispositivo noto come cell strainer.
In caso di problemi con la macchina, per esempio, se non funziona correttamente, si consiglia di contattare un esperto che assisterà nella sua riparazione. Un altro problema che potrebbe verificarsi è l'interferenza del segnale. Ciò significa che segnali estranei possono alterare i risultati. Per mitigarlo, si dovrebbe impostare il cytometria a flusso multicolore accuratamente con un rumore di sfondo minimo durante un dato esperimento, specialmente con dati auditivi.
Esempi di due coloranti importanti utilizzati in cytometria a flusso a singola cellula (HC) sono Hoechst 33342 e Propidium iodide (PI). Hoechst 33342 è un colorante luminoso che i ricercatori usano per contrassegnare le cellule vive. Può anche aiutare a stabilire se le cellule sono sane e vive. Al contrario, PI è un marcatore per le cellule non efficaci, poiché marca il DNA danneggiato. Quando il PI si lega al DNA, fa brillare le cellule morte di colore rosso, permettendo ai ricercatori di identificarle facilmente.
Hoechst 33342 è anche utile per gli scienziati, poiché può essere utilizzato quando hanno bisogno di verificare se le cellule sono vive o no durante i test di citometria a flusso. In questo modo, i ricercatori tingono le cellule con citometria a flusso microfluidica e viene combinato con altri coloranti luminosi per misurare la vitalità cellulare, cioè per capire se le cellule sono vive o morte. Questa tecnica può inoltre informare gli scienziati su come le cellule stavano crescendo e se stavano subendo un processo chiamato apoptosi, quando una cellula muore in modo sicuro e naturale.
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